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PCRは、多くの疾患の診断に使用されている検査です。 PCR法は、生物、特にそのDNA中の細菌の直接の存在を示すことを可能にします。特にPCRテストが使用されますライム病の診断に。 PCRテクニックとは何ですか？リアルタイムPCRとは何ですか？
目次：
- PCR（テスト）-PCRテクニックとは何ですか？
- PCR（研究）-PCR法の応用
- PCR（研究）-ライム病
- PCR（研究）-結果。それらは誤検知になりますか？
- PCR（研究）-結果。彼らは偽陰性になることができますか
PCR（ポリメラーゼ連鎖反応）は、遺伝子および分子研究所で使用される基本的な方法です。 1983年に1993年にノーベル賞を受賞したKara Mullisによって開発されました。
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PCR（テスト）-PCRテクニックとは何ですか？
PCRテストは、ポリメラーゼ酵素を使用して、ボレリアタンパク質をコードする遺伝子などの特定のDNAフラグメントを複数回（通常は30〜40サイクル）増幅します。
次に、特別な分子色素を使用して、増幅されたDNAフラグメントを可視化します。特定のDNAフラグメントの増幅によるPCRは、非常に感度の高い方法です。
PCR法では、細菌DNAの特定の領域に対して特定のプライマーペアでDNAフラグメントが増幅されます。たとえば、ライム病の診断に使用されるPCRのターゲット領域は、タンパク質をコードする遺伝子です。 16S rDNA、recA、fla、p66、OspA。
テストを実行できる生体材料は次のとおりです。
- 血液
- 移動性紅斑の皮膚の一部
- 脳脊髄液
- 滑液または関節軟骨から
- 尿
PCR（研究）-PCR法の応用
PCR法を用いたライムボレリア症の診断に加えて、他の微生物または人間の特定のDNA断片を検出することが可能です。したがって、PCR法は次の場合にも使用されます。
- ウイルス感染の診断とモニタリング：ヘルペスウイルス（ヘルペスウイルス、帯状疱疹、エプスタインバー、サイトメガロウイルス）、HIV、肝炎ウイルス（HBVおよびHCV）
- 細菌感染症の診断とモニタリング、特に結核などの培養では特定できない細菌
- 腫瘍性疾患の診断とモニタリング：白血病、乳がん、結腸直腸がん、肺がん
- がん素因の診断：乳がんと卵巣がん（BRCA1およびBRCA2遺伝子）、結腸直腸がん（APCおよびCHEK2遺伝子）
- 遺伝性疾患の診断：ヘモクロマトーシス（HFE遺伝子）、サラセミア（HBA1およびHBA2遺伝子）、セリアック病（HLA遺伝子）
- 子供と父親のDNA適合性を検出する父子鑑定
現在、PCR法には多くの変更があります。例えば、ライムボレリア症の診断では、主にネステッドPCRとリアルタイムPCRが使用されます。後者は定量的方法であり、テストされた生体物質中のボレリアDNAコピーの正確な数を決定することができます。
PCR（研究）とライム病
血清学的検査はライム病の診断の基礎です。ただし、これらのテストが偽陰性になる可能性がある臨床状況があります。
- 血清学的ウィンドウ、すなわち体がボレリア・スピロヘータに対する特異的なIgMおよびIgG抗体をまだ産生していない感染の初期期間
- 十分な抗体を産生しない免疫不全の人々
- ボレリアのスピロヘータ抗原とそれらに特異的な抗体からなる免疫複合体が存在し、血清学的方法による抗体の検出を妨げる
ライム病の症状が患者に疑われ、血清学的検査結果が陰性である場合、PCR法に基づく分子検査を行うことができます。
ボレリアスピロヘータのDNAは感染の初期段階で検出できます。体液中のスピロヘータの数が最も多いからです。
ライムボレリア症の診断では、ELISAなどの血清学的方法が主に使用されますが、一部の臨床状況では、PCR方法を使用した遺伝子検査が役立ちます。
感染からの時間が長いほど、細菌DNAを検出する可能性は低くなります。したがって、場合によっては、PCRテストを実行する前に、細菌を特別な培地で1〜2週間増殖させてからテストを実行することがあります。
このアプローチは、ライム病の疑いがあり、脳脊髄液を採取した場合に使用されます。感染の後期には、ELISA検査を行うことがより適切です。
ポーランドではボレリアブルグドルフェリ品種の発生に関する標準化が行われていないため、ライムボレリア症の日常診断ではPCR法を使用しないでください。
ただし、診断が困難な場合（特に疾患の初期段階）は、PCRテストの結果が診断プロセスに役立ちます。
陽性の検査結果は、検査された資料でBorrelia burgdorferi DNAおよびその変種の存在が検出されたことを意味しますが、体内で活発な感染が起こっているかどうかは説明されません。一方、否定的な結果は、体内の細菌の存在を排除するものではありません。
いくつかの実験室では、ダニにボレリアDNAが存在するかどうかの検査を提供しています。しかし、そのような検査の結果は、かまれた人のライム病の診断の根拠にはなりません。
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ELISAテスト-それは何を検出しますか？結果を読むには？テストの価格PCR-結果。それらは誤検知になりますか？
PCRは非常に敏感な方法であり、同時に汚染に非常に敏感です。したがって、PCRベースのテストでは、誤検知を排除するために適切な内部統制を選択することが非常に重要です。
重要なのは、テスト用の資料の正しいコレクションと、テストを実行する診断担当者の経験と信頼性です。
PCR-結果。彼らは偽陰性になることができますか
他の実験室試験と同様に、PCR法でも、偽陰性の結果が現れることがあります。ここでは、適切な抗凝固剤のために血液を収集することが重要です。ヘパリンなどの一部は、PCR反応を阻害する可能性があるためです。
また、抗生物質療法の開始後に材料を収集すると、PCR反応の効率が低下し、偽陰性の結果が出る可能性が高くなります。
また、ボレリア属細菌は、特別な受容体のおかげで体内の「届きにくい」場所に非常に速く浸透するため、血液や体液中で非常に短い期間生きていることも覚えておく必要があります。
したがって、他の微生物の診断とは対照的に、生物学的材料中のボレリアスピロヘータの数は少なく、PCR法の検出限界でも時々です。これは偽陰性の原因にもなります。
おすすめ記事：
リンパ球形質転換試験（LTT）文献
- Dunaj J. et al。ライムボレリア症の診断におけるPCR法の重要性。ブラウズエピデミオール。 2013、67、119-123。
- ダニ媒介性疾患の検査診断ワーキンググループの推奨事項：国立検査診断院、国立衛生研究所、国立衛生研究所、感染症分野の国立コンサルタント、感染症および神経感染症学部、ビアウィストク医科大学、ポーランドウイルス学会、ワルシャワ2014。
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